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    真菌毒素/application當前位置: 首頁(yè) ? 行業(yè)應用 ? 食品安全 ? 真菌毒素 ? 正文
    離子交換固相萃取 - HPLC檢測糧食赭曲霉毒素A(OA)研究
    發(fā)布日期:2019-03-29

    (1) 樣品處理

    1.1 提取用試劑

    提取液:含20% 0.1 mol/L氫氧化鉀溶液60%甲醇水溶液;

    淋洗液:含30% 0.1mol/L氫氧化鉀溶液,50%乙腈水溶液;

    洗脫液:甲醇:乙腈:甲酸:蒸餾水=4:5:0.5:0.5

    1. 2 提取

    a) 玉米:將樣品粉碎,稱(chēng)取玉米粉10g,加入50mL氯仿,震蕩3~5分鐘,用濾紙過(guò)濾,取濾液10mL進(jìn)入一個(gè)100mL平底燒瓶中,于60℃水浴中旋轉蒸發(fā)至近干,用20mL石油醚溶解殘渣,加入10mL提取液,震蕩3~5分鐘,分層后,用濾紙過(guò)濾,取下層提取液5mL進(jìn)行固相萃取。

    b) 糙米、小麥、小麥粉和大豆:將樣品粉碎,稱(chēng)取粉碎樣品l0g,加入50mL提取液,震蕩3~5分鐘,用濾紙過(guò)濾,取濾液10mL進(jìn)入一個(gè)100mL平底燒瓶中,加入20mL石油醚,震蕩3~5分鐘,分層后,用濾紙過(guò)濾,取下層提取液5mL至Qdaura 卓睿全自動(dòng)固相萃取儀上樣管中進(jìn)行固相萃取操作。

    (2) 固相萃取凈化

    Cleanert PAX固相萃取柱置于Qdaura卓睿全自動(dòng)固相萃取儀中,上樣管至于對應位置,設定操作程序如下:5mL甲醇,3mL提取液活化,加樣5mL,10mL淋洗液淋洗,吹干,最后用5mL洗脫液洗脫OA,收集(以上操作流速均為1mL/min)。收集液于60℃水浴中旋轉蒸發(fā)至干,用1mL流動(dòng)相溶解殘留物,經(jīng)濾器過(guò)濾后上液相色譜檢測。

    (3) 色譜條件

    色譜柱:Venusil ASB C18柱 (4.6 mm×250mm, 5μm)

    保護柱:Venusil ASB C18柱 (4.6mm×10mm, 5μm)

    流動(dòng)相:乙腈:水:乙酸=48:51:1;

    檢測器波長(cháng):激發(fā)光333 nm,發(fā)射光460 nm;

    進(jìn)樣量:25μL;流速:1mL/min;柱溫:30℃

    (4) 結果

    以小麥粉、小麥、玉米、糙米和大豆為研究對象,分別作三個(gè)不同濃度OA添加水平,這三個(gè)濃度分別為0.8μg/kg、4μg/kg、10μg/kg,每個(gè)濃度水平作6次平行性檢測。檢測回收率和精密度數據見(jiàn)表l、表2和表3;典型色譜圖見(jiàn)圖3。

    表1 添加OA濃度為0.8μg/kg時(shí)各種糧食回收率和精密度:

    糧食

    各個(gè)平行試驗回收率(%)

    平均回收率(%)

    RSD(%)

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    小麥粉

    101.8

    107

    101.4

    89.1

    107.6

    93.4

    104.1

    4.93

    小麥

    98.2

    94.6

    90.2

    102.5

    89.9

    93.4

    94.8

    5.13

    玉米

    1130.3

    112.2

    100.5

    98.5

    101.9

    105.7

    104.8

    5.13

    糙米

    86.7

    89

    90.9

    85.7

    90

    86.7

    88.2

    2.36

    大豆

    101.2

    100.9

    92.9

    92.2

    99.4

    98.4

    97.5

    4.07

    表2 添加OA濃度為4μg/kg時(shí)各種糧食回收率和精密度:

    糧食

    各個(gè)平行試驗回收率(%)

    平均回收率(%)

    RSD(%)

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    小麥粉

    96.8

    92.8

    83.7

    85.5

    89.8

    92.6

    90.2

    5.34

    小麥

    101

    99.3

    98.8

    106.2

    100.2

    98.6

    100.7

    2.78

    玉米

    91.5

    92.7

    90.8

    86.8

    87.7

    91.3

    90.1

    2.6

    糙米

    90.3

    85.7

    94.1

    96.3

    96.1

    95.8

    93

    4.56

    大豆

    89.5

    93.8

    93.7

    89.4

    89.1

    88.9

    90.7

    2.61

    表3 添加OA 濃度為10μg/kg 時(shí)各種糧食回收率和精密度:

    糧食

    各個(gè)平行試驗回收率(%)

    平均回收率(%)

    RSD(%)

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    小麥粉

    98

    95.8

    92.2

    78.2

    95.6

    89.8

    91.6

    7.85

    小麥

    85.9

    91.7

    90.1

    86

    90.5

    88.9

    88.8

    2.71

    玉米

    91.5

    93.3

    83.3

    82.1

    88.1

    90.6

    88.1

    5.22

    糙米

    96.2

    87.9

    92.6

    91.1

    95.4

    94.7

    93

    3.35

    大豆

    99

    95.3

    102.8

    97.2

    98.4

    91

    97.3

    4.05

    表3 小麥中OA 檢測典型色譜圖:

    離子交換固相萃取 - HPLC檢測糧食赭曲霉毒素A(OA)研究

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    規格包裝

    訂貨號

    Qdaura卓睿全自動(dòng)固相萃取儀

    4通道24位

    SPE-40

    LC-10F高效液相色譜儀

    10ml/min, 梯度系統,200-800nm雙波長(cháng)檢測器

    FL-LC010GS

    CC-100分析型色譜柱溫箱

    溫控范圍:5-70℃;可安裝1-2支300mm色譜柱

    CC-100

    Cleanert PAX固相萃取柱

    200mg/6mL, 30/pk

    AX2006

    Venusil ASB C18液相色譜柱

    4.6 mm ×250 mm, 5μm

    VS952505-0

    Venusil ASB C18保護柱

    4.6mm×10mm, 5μm

    VS950105-0

    針式過(guò)濾器(Nylon)

    0.22μm, 直徑13mm,200/pk

    AS021320

    一次性無(wú)針頭注射器

    5mL, 100/pk

    ZSQ-5ML

    1.5mL樣品瓶

    短螺紋透明帶書(shū)寫(xiě)32×11.6mm,100/pk

    1109-0519

    1.5mL樣品瓶蓋

    9mm中心孔藍蓋,紅色橡膠/米色PTFE隔墊,45.Shore A1.0mm,100/pk

    0915-1819

    甲醇

    4×4L/箱

    AH230-4

    乙腈

    4×4L/箱

    AH015-4

    應用編號:CU1010

    在線(xiàn)客服
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