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    (GB 5009.84-2016) 嬰幼兒配方奶粉中維生素B1 的測定
    發(fā)布日期:2019-03-29

    前言

    維生素B1又稱(chēng)硫胺素或抗神經(jīng)炎維生素或抗腳氣病維生素,由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基結合而成的一種B族維生素。維生素B1主要存在于種子的外皮和胚芽中,如米糠和麩皮中含量很豐富,在酵母菌中含量也極豐富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也較豐富。所用的維生素B1都是化學(xué)合成的產(chǎn)品。在體內,維生素B1以輔酶形式參與糖的分解代謝,有保護神經(jīng)系統的作用;還能促進(jìn)腸胃蠕動(dòng),增加食欲。維生素B1缺乏時(shí),可引起多種神經(jīng)炎癥,如腳氣病。維生素B1缺乏所引起的多發(fā)性神經(jīng)炎,患者的周?chē)窠?jīng)末梢有發(fā)炎和退化現象,并伴有四肢麻木、肌肉萎縮、心力衰竭、下肢水腫等癥狀。在現代醫學(xué)上,維生素B1制劑治療腳氣病和多種神經(jīng)炎癥有顯著(zhù)療效。

    實(shí)驗部分

    儀器、試劑與材料

    主要儀器設備

    高效液相色譜儀-熒光檢測器

    試劑材料

    正丁醇、鐵氰化鉀、氫氧化鈉、鹽酸、乙酸鈉、氯化鈣均為分析純;

    冰乙酸、甲醇為色譜純

    維生素B1標準品(純度99%):鹽酸硫胺素,CAS 67-03-8;

    木瓜蛋白酶:應不含維生素B1,酶活力≥800 U(活力單位)/mg;

    淀粉酶:應不含維生素B1,酶活力≥3700 U/g;

    20 g/L鐵氰化鉀溶液:稱(chēng)取2 g鐵氰化鉀,用水溶解并定容至100 mL,搖勻;

    100 g/L氫氧化鈉溶液:稱(chēng)取25 g氫氧化鈉,用水溶解并定容至250 mL,搖勻;

    堿性鐵氰化鉀溶液:將5 mL上述鐵氰化鉀溶液與200 mL上述氫氧化鈉溶液混合,搖勻;

    0.1 mol/L鹽酸溶液:移取8.5 mL鹽酸,加水稀釋至1000 mL,搖勻;

    0.01 mol/L鹽酸溶液:量取0.1 mol/L鹽酸溶液50 mL,用水稀釋并定容至500 mL,搖勻;

    0.05 mol/L乙酸鈉溶液:稱(chēng)取6.08 g乙酸鈉,加900 mL水溶解,用冰乙酸調節pH為4.0 ~ 5.0之間,加水定容至1000 mL,經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后使用;

    2.0 mol/L乙酸鈉溶液:稱(chēng)取27.2 g乙酸鈉,用水溶解并定容至100 mL,搖勻;

    混合酶溶液:稱(chēng)取1.76 g木瓜蛋白酶、1.27 g淀粉酶,加水定容至50 mL,渦旋,使呈混懸狀液體,冷藏保存。

    樣品制備

    樣品提取

    稱(chēng)取3 g ~ 5 g固體試樣或者10 g ~ 20 g液體試樣于100 mL錐形瓶中(帶有軟質(zhì)塞子),加60 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液,充分搖勻,塞上軟質(zhì)塞子,高壓滅菌鍋中121℃保持30 min。水解結束待冷卻至40℃取出,輕搖數次,用2.0 mol/L乙酸鈉溶液調節pH至4.0左右,加入2 mL(可根據酶活力不同適當調整用量)混合酶溶液,搖勻后,置于培養箱中37℃過(guò)夜(約16 h),將酶解液全部轉移至100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,搖勻,離心或者過(guò)濾,取上清液備用。

    樣品衍生化

    準確移取上述上清液或者濾液2 mL于10 mL試管中,加入1 mL堿性鐵氰化鉀溶液,渦旋混勻后,準確加入2 mL正丁醇,再次渦旋混勻1.5 min后靜置約10 min或者離心,待充分分層后,吸取正丁醇相(上層)經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾,取濾液于2 mL棕色進(jìn)樣瓶中,待檢測。若樣品中維生素B1濃度超出線(xiàn)性范圍的最高濃度值,應取上清液稀釋適宜倍數后,重新衍生后進(jìn)樣。

    實(shí)驗條件

    液相條件

    色譜柱:Venusil® XBP C18(2)  5 μm, 4.6 × 250 mm,100 ?

    流動(dòng)相:0.05 mol/L乙酸鈉溶液︰甲醇 = 65︰35

    熒光檢測器檢測波長(cháng):激發(fā)波長(cháng)375 nm,發(fā)射波長(cháng)435 nm

    流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL

    結果與討論

    實(shí)驗結果

    經(jīng)圖1、圖2可知,采用Venusil XBP C18(2)色譜柱檢測嬰幼兒配方奶粉中的維生素B1,峰形良好,保留時(shí)間穩定,能夠滿(mǎn)足實(shí)驗要求。

    (GB 5009.84-2016) 嬰幼兒配方奶粉中維生素B1 的測定

    圖1 維生素B1標準溶液

    (GB 5009.84-2016) 嬰幼兒配方奶粉中維生素B1 的測定

    圖2 嬰幼兒配方奶粉中的維生素B1

    結論

    本實(shí)驗依據GB 5009.84-2016第一法,用Venusil XBP C18(2)(5 μm,100 ?,4.6 × 250 mm)檢測嬰幼兒配方奶粉中的維生素B1,并結合液相色譜-熒光檢測器對樣品進(jìn)行了檢測,結果維生素B1保留時(shí)間穩定,峰形良好,說(shuō)明Venusil XBP C18(2)(5 μm,100 ?,4.6 × 250 mm)能夠用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的檢測。

    注意事項

    按照國標法進(jìn)行樣品前處理時(shí)回收率較低,可采用先熱超聲提取,再經(jīng)過(guò)酸沉淀蛋白后直接衍生化的方法加以改善。熱超聲時(shí)要注意溫度的控制,以防止維生素B1遭到破壞。

    因維生素B1為強極性化合物實(shí)驗中應注意流動(dòng)相比例的確定,且流動(dòng)相的pH對出峰時(shí)間影響較大,因此在每次開(kāi)始實(shí)驗前,要調節流動(dòng)相pH 值到相同的值。

    附:相關(guān)產(chǎn)品

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    規格描述

    包裝數量

    訂貨號

    Venusil XBP   C18(2)

    4.6 × 250 mm, 5μm, 100 ?

    1支

    VX952505-2

    1.5 mL樣品瓶

    短螺紋透明帶書(shū)寫(xiě)處

    32 × 11.6 mm

    100/pk

    1109-0519

    1.5mL樣品瓶蓋

    9 mm中心孔藍蓋,紅色橡膠/米色PTFE隔墊

    45°Shore A; 1.0 mm

    100/pk

    0915-1819

    微孔濾膜

    尼龍,50 mm,0.45 μm

    100片

    AM025045

    應用編號:AF10010

    在線(xiàn)客服
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