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    《中國藥典》2015 年版鹽酸水蘇堿采用的親水色譜柱(中國藥典2015)
    發(fā)布日期:2019-03-29

    專(zhuān)用柱信息

    Venusil stachydrine鹽酸水蘇堿專(zhuān)用色譜柱專(zhuān)為分析益母草中鹽酸水蘇堿而設計。該產(chǎn)品是以硅膠為基質(zhì),鍵合相由于采用了中性的酰胺基團,在親水作用色譜模式下對強極性、水溶性堿性有機化合物有很好的選擇性。

    HILIC是一種親水作用色譜模式,其洗脫是以化合物親水性/極性增加的次序排列,提高流動(dòng)相中有機相的比例會(huì )增加溶質(zhì)的保留,典型的流動(dòng)相是乙腈(40%--97%)/水(或揮發(fā)性緩沖鹽),同時(shí)它可以使用更高揮發(fā)性的流動(dòng)相或緩沖鹽,方便了與質(zhì)譜檢測器和蒸發(fā)光檢測器的聯(lián)用。

    鹽酸水蘇堿測試方法和分析圖譜

    參照2015版中國藥典一部益母草含量測定項下的色譜條件:

    以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑,以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80:20)為流動(dòng)相,蒸發(fā)光散射檢測器檢測。要求理論塔板數以鹽酸水蘇堿計算應不低于6000。

    色譜柱:Venusil stachdrine;5μm,4.6*250mm

    訂貨號:VH952505-LH

    流動(dòng)相:乙腈︰0.2%冰醋酸溶液=80︰20(v/v)

    流  速:0.5 mL/min

    柱  溫:20℃

    檢測器:ELSD(蒸發(fā)光散射檢測器)

    進(jìn)樣量:10μL

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    保留時(shí)間/min

    理論塔板數

    拖尾因子

    17.888

    15203

    1.06

    安裝

    1、拆開(kāi)柱包裝盒,確認色譜柱的類(lèi)型、規格。

    2、擰下柱兩端的密封堵頭放回包裝盒備用。

    3、按柱管上標示的流動(dòng)相流向,使用PEEK頭及PEEK管或不銹鋼管件將色譜柱連接到檢測儀器。

    4、使用小內徑的連接管件,分析柱一般使用內徑為0.25 mm (0.010") 的管路,和縮短連接管路的長(cháng)度,從而減少死體積。

    使用和維護

    防護

    在連接和使用色譜柱時(shí)要注意安全,佩戴手套、口罩和防護鏡,任何原因(管路連接不緊、管路老化、PEEK頭老化)導致的溶劑和樣品泄露直接接觸到操作人員,都會(huì )對操作人員的健康產(chǎn)生影響。

    使用方向

    色譜柱在使用過(guò)程中要保持流動(dòng)相方向和色譜柱標示的箭頭方向一致,如無(wú)特殊情況,不建議反向使用(如為清洗色譜柱前柱頭的污染物時(shí),可考慮低流速反向沖洗)

    活化

    新的鹽酸水蘇堿專(zhuān)用柱出廠(chǎng)時(shí)柱體中的液相為乙腈,在儲存和運輸過(guò)程中柱體可能會(huì )出現短暫干涸,故新柱第一次使用前需使用大于20倍柱體積的乙腈以0.5mL/min的流速進(jìn)行活化后再選擇實(shí)驗所需的操作條件進(jìn)行平衡,如果實(shí)驗所需的流動(dòng)相中含緩沖液,需使用與流動(dòng)相等比例的有機相和水進(jìn)行過(guò)渡,避免出現鹽析現象。

    樣品前處理

    為了避免樣品或流動(dòng)相中的微粒雜質(zhì)對色譜柱前篩板造成堵塞,實(shí)驗所用的所有試劑和樣品在使用前都應使用0.45μm或0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。對于基質(zhì)較復雜的樣品,推薦使用SPE固相萃取系統進(jìn)行前處理。

    流動(dòng)相和樣品pH

    為了使色譜柱獲得更佳的壽命和效果,請遵循廠(chǎng)家建議的pH范圍內使用,鹽酸水蘇堿專(zhuān)用柱pH最佳適用范圍為2.0-6.0,pH過(guò)高會(huì )使硅膠溶解,pH過(guò)低會(huì )導致部分或全部的鍵合相脫落,出現柱性能下降,造成實(shí)驗結果不重現。

    流動(dòng)相和樣品溶劑

    應避免流動(dòng)相在高有機相體系下使用與有機相不互溶的磷酸鹽或其他緩沖鹽,避免由于鹽析損壞色譜柱。為不干擾HILIC分離機制,不要使用三氟乙酸和其他離子對試劑。如果可能,請盡量選擇流動(dòng)相溶解樣品,不要使用水或DMSO溶解樣品,避免出現溶劑效應導致的峰型變差。

    柱溫和壓力

    最高操作溫度應低于60℃,長(cháng)期在高溫下使用(>60℃)會(huì )損壞色譜柱,這種情況在Ph>6.0時(shí)表現最為明顯。色譜柱可承受400Bar的壓力,但長(cháng)期處于高壓狀態(tài)會(huì )影響色譜柱的性能和使用壽命,正常操作使用時(shí)建議柱壓應低于200Bar。

    保護柱

    在進(jìn)行基質(zhì)較復雜的樣品分析時(shí),為使色譜柱獲得更好的壽命,建議在色譜柱前使用保護柱,阻擋系統中的微粒和延緩樣品對固定相的化學(xué)污染。

    沖洗程序

    色譜柱使用完畢后需依次使用50%乙腈、5%乙腈、100%乙腈以0.5mL/min沖洗至少20倍柱體積,如果柱前有連接保護柱,需與色譜柱斷開(kāi)分別進(jìn)行沖洗。

    儲存

    儲存色譜柱時(shí),不要有水或緩沖液留在色譜柱中,可使用乙腈作為色譜柱的封存溶劑。

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