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河北來(lái)復醫藥科技有限公司
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?類(lèi)固醇激素又稱(chēng)為甾體激素，是內分泌細胞分泌的高效能生物化學(xué)物質(zhì)。它們在維持生命、調節機體物質(zhì)代謝、促進(jìn)性器官發(fā)育和維持生育等方面起著(zhù)重要作用。
類(lèi)固醇激素在體內的含量較低，對其準確定量具有重要意義。本實(shí)驗采用Cleanert SLE對血清樣品進(jìn)行凈化，建立了血清中類(lèi)固醇激素的檢測方法，可為臨床研究提供參考。
目標物信息
表1 目標物結構信息
|
名稱(chēng) |
CAS |
結構 |
|
可的松 |
53-06-5 |
|
|
黃體酮 |
57-83-0 |
|
|
睪酮 |
58-22-0 |
|
|
勃地酮 |
846-48-0 |
|
材料
Cleanert SLE (200mg/3mL)；Cleanert M96 生物樣品前處理儀；Cleanert V96 氮吹濃縮儀；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）；API 4000+。
樣品處理方法
移取200μL血清樣品至樣品管中，并加入一定體積的甲醇，使溶液中甲醇的含量為5%，搖勻待凈化。
將經(jīng)過(guò)預處理的血清樣品上樣至Cleanert SLE中，可開(kāi)啟負壓裝置(真空度＜-0.04MPa)將樣品抽過(guò)上篩板或使用Cleanert M96 生物樣品前處理儀將樣品壓下篩板，待樣品全部流至填料中后，靜止10min。
在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目標物的洗脫，控制洗脫速度為1~2mL/min，在第一次洗脫完成之后，間隔1min再進(jìn)行第二次洗脫，合并洗脫液。
將合并的洗脫液用96位氮吹儀進(jìn)行氮吹濃縮，溫度設定為40℃，氮吹至近干。
使用200μL乙腈/水（3/7，v/v）將樣品進(jìn)行重溶，搖勻，進(jìn)樣檢測。
儀器檢測條件
正模式方法（針對黃體酮、睪酮、勃地酮）
HPLC條件
色譜柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）
流速：200μL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：5μL
流動(dòng)相：水/乙腈（45/55，v/v）
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離正模式
采集模式：多反應監測（MRM）
表2 質(zhì)譜參數
|
ID |
保留時(shí)間/min |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
勃地酮 |
1.66 |
287.3 |
121.3 |
110 |
30 |
|
287.3 |
135.3 |
109 |
24 |
||
|
睪酮 |
1.95 |
289.3 |
97.1 |
114 |
30 |
|
289.3 |
109.2 |
115 |
36 |
||
|
黃體酮 |
4.16 |
315.4 |
97.1 |
95 |
35 |
|
315.4 |
109.1 |
95 |
39 |
負模式方法（針對可的松）
HPLC條件
色譜柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）
流速：200μL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：5μL
流動(dòng)相：水/乙腈（70/30，v/v）
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離負模式
采集模式：多反應監測（MRM）
表3 質(zhì)譜參數
|
ID |
保留時(shí)間/min |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
可的松
|
2.55 |
405.3 |
359 |
-60 |
-12 |
|
405.3 |
328.8 |
-40 |
-18 |
||
|
405.3 |
300.9 |
-55 |
-26 |
結果
表4 數據結果
|
化合物 |
加標回收率-1 |
加標回收率-2 |
LOD/ng/mL |
|
黃體酮 |
67.90% |
63.48% |
0.15 |
|
睪酮 |
86.94% |
78.57% |
0.04 |
|
勃地酮 |
97.78% |
94.07% |
0.12 |
|
可的松 |
103.53% |
107.69% |
0.02 |
圖1 可的松標準溶液色譜圖（濃度為5 ng/mL）
圖2 勃地酮、睪酮與黃體酮標準溶液色譜圖（濃度為5 ng/mL）
圖3 血清樣品色譜圖（負模式）
圖4 血清樣品色譜圖（正模式）
圖5 血清加標樣色譜圖（負模式-加標濃度為5ng/mL）
圖6 血清加標樣色譜圖（正模式-加標濃度為5ng/mL）
訂貨信息表
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格/包裝 |
訂貨號 |
|
Cleanert SLE |
96深孔板，200mg/3mL |
HC2003-9 |
|
96孔板負壓裝置 |
與96孔板匹配 |
VM96 |
|
Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
|
Cleanert V96 氮吹濃縮儀 |
與96孔板匹配 |
NV96-G |
|
96孔接收板 |
2mL/well，與96孔板匹配 |
96SP2036-2 |
|
Venusil ASB C18 |
2.1*50mm，3μm,150 ? |
VS930502-0 |
|
乙腈 |
HPLC, 4*4L |
AH015-4 |
|
水 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC365 |
應用編號：YB10010
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