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河北來(lái)復醫藥科技有限公司
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類(lèi)固醇激素又稱(chēng)為甾體激素，是內分泌細胞分泌的高效能生物化學(xué)物質(zhì)。它們在維持生命、調節機體物質(zhì)代謝、促進(jìn)性器官發(fā)育和維持生育等方面起著(zhù)重要作用。
類(lèi)固醇激素在體內的含量較低，對其準確定量具有重要意義。本實(shí)驗采用Cleanert® PEP 96微孔板對血清樣品進(jìn)行凈化，建立了血清中類(lèi)固醇激素的檢測方法，該方法適合高通量樣品前處理。
目標物信息
表1 化合物結構
|
化合物 |
英文名 |
CAS |
分子量 |
結構 |
|
氫化可的松 |
Hydrocortisone |
50-23-7 |
362.46 |
|
|
睪酮 |
Testosterone |
58-22-0 |
288.42 |
|
|
黃體酮 |
Progesterone |
57-83-0 |
386.5244 |
|
|
醛固酮 |
Aldosterone |
52-39-1 |
360.44 |
|
|
脫氫表雄酮 |
Dehydroepiandrosterone |
53-43-0 |
288.4 |
|
材料及儀器
Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL)；96孔板正壓裝置；96位接收板；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150 ?）；API 4000+。
樣品處理方法
樣品預處理
100μL血清樣品與100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）
SPE過(guò)程
活化：依次用200μL甲醇、200μL水活化；
上樣：將預處理過(guò)的血清樣品上樣至96孔板中；
淋洗：加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗樣品中的干擾物；
洗脫：加入200μL 1%甲酸甲醇，用96位收集板收集洗脫液用于LC-MS/MS檢測。（將洗脫液氮吹濃縮可獲得更低的檢測限）
儀器檢測條件
HPLC條件
色譜柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150?）
流速：200μL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：3μL
流動(dòng)相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離正模式
采集模式：多反應監測（MRM）
表2 參數信息
|
ID |
tR/min |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
氫化可的松 |
0.98 |
363.2 |
120.9 |
74 |
40 |
|
363.2 |
327.2 |
70 |
23 |
||
|
睪酮 |
1.66 |
289.4 |
97.1 |
100 |
31 |
|
289.4 |
109.1 |
90 |
40 |
||
|
醛固酮 |
0.98 |
361.3 |
325.3 |
84 |
30 |
|
361.3 |
315.4 |
77 |
29 |
||
|
脫氫表雄酮 |
1.66 |
289.4 |
253.4 |
70 |
24 |
|
289.4 |
213.1 |
71 |
23 |
||
|
黃體酮 |
3.15 |
315.4 |
97.1 |
95 |
35 |
|
315.4 |
109.1 |
95 |
39 |
結果
圖1 30ppb類(lèi)固醇激素標準溶液色譜圖
圖2 血清樣品色譜圖
圖3 血清加標樣色譜圖（濃度為30ppb）
表3 加標回收率數據
|
加標濃度 |
醛固酮 |
氫化可的松 |
睪酮 |
脫氫表雄酮 |
黃體酮 |
|
30ppb |
85.9% |
87.0% |
105.5% |
110.6% |
97.7% |
結論
在臨床檢驗中類(lèi)固醇激素是一個(gè)難點(diǎn)。本實(shí)驗使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的類(lèi)固醇，加快了檢測速度，相較免疫法提高了最低檢測濃度，回收率高于85%，可滿(mǎn)足實(shí)驗室檢測相關(guān)物質(zhì)的需要。
訂貨信息表
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規格/包裝 |
訂貨號 |
|
Cleanert PEP |
96微孔板，5mg/1mL |
PE00501-MW |
|
Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
|
Cleanert V96 氮吹濃縮儀 |
與96孔板匹配 |
NV-96G |
|
96位接收板 |
1mL，與96孔板匹配 |
96SP1036-Y |
|
Venusil ASB C18 |
2.1*50mm，3μm,150 ? |
VS930502-0 |
|
甲醇 |
HPLC，4*4L |
AH230-4 |
|
乙腈 |
HPLC，4*4L |
AH015-4 |
|
水 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC365 |
應用編號：YB10007
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