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    激素檢測/application當前位置: 首頁(yè) ? 行業(yè)應用 ? 臨床檢測研究 ? 激素檢測 ? 正文
    LC/MS/MS檢測血清中類(lèi)固醇激素-Cleanert PEP
    發(fā)布日期:2019-03-29

    類(lèi)固醇激素又稱(chēng)為甾體激素,是內分泌細胞分泌的高效能生物化學(xué)物質(zhì)。它們在維持生命、調節機體物質(zhì)代謝、促進(jìn)性器官發(fā)育和維持生育等方面起著(zhù)重要作用。

    類(lèi)固醇激素在體內的含量較低,對其準確定量具有重要意義。本實(shí)驗采用Cleanert® PEP 96微孔板對血清樣品進(jìn)行凈化,建立了血清中類(lèi)固醇激素的檢測方法,該方法適合高通量樣品前處理。

    目標物信息

    表1 化合物結構

    化合物

    英文名

    CAS

    分子量

    結構

    氫化可的松

    Hydrocortisone

    50-23-7

    362.46

    LC/MS/MS檢測血清中類(lèi)固醇激素-Cleanert PEP

    睪酮

    Testosterone

    58-22-0

     288.42

    LC/MS/MS檢測血清中類(lèi)固醇激素-Cleanert PEP

    黃體酮

    Progesterone

    57-83-0

    386.5244

    醛固酮

    Aldosterone

    52-39-1

    360.44

    脫氫表雄酮

    Dehydroepiandrosterone

    53-43-0

    288.4

    材料及儀器

    Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL);96孔板正壓裝置;96位接收板;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 ?);API 4000+。

     樣品處理方法

     樣品預處理

    100μL血清樣品與100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合(50/50,v/v)

    SPE過(guò)程

    活化:依次用200μL甲醇、200μL水活化;

    上樣:將預處理過(guò)的血清樣品上樣至96孔板中;

    淋洗:加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗樣品中的干擾物;

    洗脫:加入200μL 1%甲酸甲醇,用96位收集板收集洗脫液用于LC-MS/MS檢測。(將洗脫液氮吹濃縮可獲得更低的檢測限)

    儀器檢測條件

    HPLC條件

    色譜柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150?)

    流速:200μL/min

    柱溫:30℃

    進(jìn)樣量:3μL

    流動(dòng)相:0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈( 40/ 60,v/v)

    質(zhì)譜條件

    掃描模式:電噴霧電離正模式

    采集模式:多反應監測(MRM)

    表2 參數信息

    ID

    tR/min

    Q1

    Q3

    DP

    CE

    氫化可的松

    0.98

    363.2

    120.9

    74

    40

    363.2

    327.2

    70

    23

    睪酮

    1.66

    289.4

    97.1

    100

    31

    289.4

    109.1

    90

    40

    醛固酮

    0.98

    361.3

    325.3

    84

    30

    361.3

    315.4

    77

    29

    脫氫表雄酮

    1.66

    289.4

    253.4

    70

    24

    289.4

    213.1

    71

    23

    黃體酮

    3.15

    315.4

    97.1

    95

    35

    315.4

    109.1

    95

    39

    結果

    圖1 30ppb類(lèi)固醇激素標準溶液色譜圖

    圖2 血清樣品色譜圖

    圖3 血清加標樣色譜圖(濃度為30ppb)

    表3 加標回收率數據

    加標濃度

    醛固酮

    氫化可的松

    睪酮

    脫氫表雄酮

    黃體酮

    30ppb

    85.9%

    87.0%

    105.5%

    110.6%

    97.7%

    結論

    在臨床檢驗中類(lèi)固醇激素是一個(gè)難點(diǎn)。本實(shí)驗使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的類(lèi)固醇,加快了檢測速度,相較免疫法提高了最低檢測濃度,回收率高于85%,可滿(mǎn)足實(shí)驗室檢測相關(guān)物質(zhì)的需要。

    訂貨信息表

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    規格/包裝

    訂貨號

    Cleanert PEP

    96微孔板,5mg/1mL

    PE00501-MW

    Cleanert M96 生物樣品前處理儀

    96孔板匹配

    SPE-M96

    Cleanert V96 氮吹濃縮儀

    96孔板匹配

    NV-96G

    96位接收板

    1mL,與96孔板匹配

    96SP1036-Y

    Venusil ASB C18

    2.1*50mm,3μm,150   ?

    VS930502-0

    甲醇

    HPLC,4*4L

    AH230-4

    乙腈

    HPLC,4*4L

    AH015-4

    LC-MS級,4*2.5L/

    LC365

    應用編號:YB10007

    在線(xiàn)客服
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