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    代謝物檢測/application當前位置: 首頁(yè) ? 行業(yè)應用 ? 臨床檢測研究 ? 代謝物檢測 ? 正文
    應用Cleanert MAS-M對糞便樣品中花生四烯酸進(jìn)行萃取
    發(fā)布日期:2019-03-28

    不飽和脂肪酸是構成體內脂肪的一種脂肪酸,人體必需的脂肪酸?;ㄉ南┧?AA)是一種在生物體內含量較高, 分布最廣的多不飽和必需脂肪酸。對糞便樣品中花生四烯酸的研究,可為體內脂肪酸代謝提供一定參考信息。

    本實(shí)驗采用Cleanert MAS-M對糞便樣品進(jìn)行凈化處理,建立了糞便樣品中花生四烯酸含量檢測方法。

    目標物信息

    應用Cleanert MAS-M對糞便樣品中花生四烯酸進(jìn)行萃取

    材料與儀器

    Cleanert MAS-M 96孔萃取板;Cleanert M96 生物樣品前處理儀;Cleanert V96 氮吹濃縮儀;96孔接收板;PTFE過(guò)濾頭;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150?);API 4000+ LC-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜。

    樣品處理方法

    樣品前處理

    稱(chēng)取50mg糞便樣品加入5mL離心管中,向其中加入0.5mL 1%甲酸水,渦旋混勻2min,再向其中加入1.5mL甲醇,渦旋,6000r/min離心5min,取上清液;重復上述步驟再提取一次,合并上清液,過(guò)0.22μm PTFE濾頭,向其中加入0.6mL氨水,使上樣液中含有4%氨水,待凈化。

    凈化過(guò)程

    所用SPE為Cleanert MAS-M 96孔萃取板

    活化:甲醇600μL,水600μL

    上樣:待凈化液全部上樣,上樣液棄去

    淋洗:水600μL,甲醇600μL,棄去

    洗脫:3%甲酸乙腈溶液600μL,使用96孔收集板將洗脫液分別收集。

    將收集板放置于96位氮吹儀上,將溫度設定為45℃,開(kāi)啟氮氣將洗脫液氮吹至近干,并用100μL乙腈/水(7/3,v/v)將樣品重溶,進(jìn)樣檢測。

    儀器檢測條件

    HPLC條件

    色譜柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150?)

    流速:200μL/min

    柱溫:30℃

    進(jìn)樣量:5μL

    流動(dòng)相:乙腈/水(75/25,v/v)

    質(zhì)譜條件

    掃描模式:電噴霧電離負模式

    采集模式:多反應監測(MRM)

    表1 質(zhì)譜參數

    化合物

    Q1

    Q3

    DP

    CE

    花生四烯酸

    303.0

    259.1

    -109

    -18

    303.0

    230.9

    -85

    -29

    303.0

    205.1

    -107

    -20

    303.0

    177.1

    -90

    -30

    應用Cleanert MAS-M對糞便樣品中花生四烯酸進(jìn)行萃取

    圖1 花生四烯酸標準溶液色譜圖(濃度為5ppm)

    圖2 糞便樣品色譜圖

    圖3 糞便樣品加標色譜圖(加標濃度為10mg/kg)

    實(shí)驗所用的糞便樣品中含有約3mg/kg的花生四烯酸,計算加標回收率時(shí)需要扣除樣品中目標物的含量。

    表2 回收率數據

    加標濃度

    平均加標回收率

    LOD

    10mg/kg

    88.9%

    1μg/kg

    結論

    本實(shí)驗采用Cleanert MAS-M 96孔板對糞便樣品中的花生四烯酸進(jìn)行批量樣品高通量前處理。實(shí)驗結果表明Cleanert MAS-M能夠有效除去干擾物,并能夠對花生四烯酸進(jìn)行定量萃取,回收率達到88.9%,可以滿(mǎn)足日常對批量生物樣品分析的需求。

    訂貨信息表

    產(chǎn)品名稱(chēng)

    規格/包裝

    訂貨號

    Cleanert MAS-M

    96孔板,50mg/2mL

    MS-M-0502W

    PTFE濾頭

    0.22μm,200/pk

    AS041320

    Cleanert V96 氮吹濃縮儀

    與96孔板匹配

    NV96-G

    Cleanert M96 生物樣品前處理儀

    與96孔板匹配

    SPE-M96

    96孔接收板

    2mL/well,與96孔板匹配

    96SP2036-Y

    Venusil ASB C18

    2.1*50mm,3μm,150?

    VS930502-0

    乙腈

    LC-MS級, 4*2.5L/箱

    LC015

    LC-MS級,4*2.5L/箱

    LC365

    甲醇

    HPLC, 4*4L

    AH230-4

    1.5mL棕色進(jìn)樣樣品瓶

    100/pk

    1109-0520

    進(jìn)樣樣品瓶瓶蓋

    100/pk

    0915-1819

    樣品瓶?jì)炔骞?

    100/pk

    0609-0357

    應用編號:YB10002

    在線(xiàn)客服
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