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    化妝品中11種糖皮質(zhì)激素的分析方法
    發(fā)布日期:2019-03-27

    糖皮質(zhì)激素是臨床常用的一類(lèi)藥物,對皮膚病有良好的消炎作用,可抑制纖維細胞增生,減少5-羥色胺的形成,因此其在短時(shí)間使用對皮膚有一定的嫩白作用【1】。但長(cháng)期使用則會(huì )發(fā)生皮膚變薄、毛細血管擴張、毛囊萎縮,一旦停用,皮膚就會(huì )發(fā)紅、發(fā)癢,出現紅斑、皮疹等。因此我國《化妝品衛生規范》【2】明確規定此類(lèi)物質(zhì)為禁用成分。目前糖皮質(zhì)激素的檢測多集中在藥品中有效成分和尿液中糖皮質(zhì)激素的檢測【3-7】,化妝品中糖皮質(zhì)激素的檢測文獻報道的較少。本文采用CLearnert PEP-2 SPE凈化的方法,建立了一種化妝品中潑尼松、潑尼松龍、可的松、氫化可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松、醋酸可的松、醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、曲安奈德11種糖皮質(zhì)激素同時(shí)檢測的方法。

    實(shí)驗方法

    .實(shí)驗試劑和材料

    糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物標準品(詳見(jiàn)表1)

    表1 糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物標準品信息

    中文名

    英文名

    CAS

    相對分子質(zhì)量

    潑尼松龍

    Prednisone

    50-24-8

    360.1937

    氫化可的松

    Hydrocortisone

    50-23-7

    362.2093

    潑尼松

    Prednisone

    53-03-2

    358.1780

    可的松

    Cortisone

    53-06-5

    360.1937

    甲基潑尼松龍

    MethyLprednisoLone

    83-43-2

    374.2093

    倍他米松

    Betamethasone

    378-44-9

    392.1999

    地塞米松

    Dexamethasone

    50-02-2

    392.1999

    曲安奈德

    TriamcinoLone acetonide

    76-25-5

    434.2105

    氫化可的松醋酸酯

    Hydrocortisone 21-acetate

    50-03-3

    404.2200

    潑尼松醋酸酯

    Prednisone 21-acetate

    125-10-0

    400.1886

    可的松醋酸酯

    Cortisone 21-acetate

    50-04-4

    402.2042

    實(shí)驗試劑(詳見(jiàn)表2)

    試劑名稱(chēng)

    品牌

    規格

    甲醇

    霍尼韋爾

    質(zhì)譜純,2.5L/瓶

    乙腈

    霍尼韋爾

    質(zhì)譜純,2.5L/瓶

    霍尼韋爾

    質(zhì)譜純,2.5L/瓶

    儀器和設備(詳見(jiàn)表3)

    設備名稱(chēng)

    品牌

    規格/型號

    串聯(lián)質(zhì)譜儀

    AB SCIEX

    API 4000+

    高效液相色譜儀

    安捷倫

    1260

    VenusiLTM ASB C18液相色譜柱

    天津博納艾杰爾科技

    2.1×150mm 3μm 150A

    分析型柱溫箱

    天津博納艾杰爾科技

    >室溫5℃~70℃

    12位固相萃取裝置

    天津博納艾杰爾科技

    12位

    CLeanertTM PEP-2 固相萃取小柱

    天津博納艾杰爾科技

    500 mg/6 mL

    針式過(guò)濾器(尼龍)

    天津博納艾杰爾科技

    0.22 um,13 mm

    分析天平

    賽多利斯

    0.1mg,220g

    高速離心機

    上海華亭

    50mL*6

    渦旋振蕩器

    Vortex-genie

    230/240VAC 50HZ

    氮吹儀

    天津博納艾杰爾科技

    15位

    糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物標準溶液配制

    標準貯備液

    分別精密稱(chēng)取適量的12種糖皮質(zhì)激素標準品,用甲醇溶解定容,分別配制成1 000μg/mL的貯備液。-20℃以下保存。

    混合標準工作液

    準確量取糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物標準貯備液適量,用20%乙腈水溶液稀釋成適宜濃度的混合標準工作液,現配現用。

    實(shí)驗試劑的配置

    10%亞鐵氰化鉀溶液:稱(chēng)量2.3g K4Fe(CN)6?3H2O,用水溶解定容至20mL;

    20%乙酸鋅溶液:稱(chēng)量4.78g C4H6O4Zn?2H2O,用水溶解定容至20mL;

    定容液:量取70mL水和30mL乙腈,混勻后加入100uL甲酸混勻。

    測定步驟

    提取

    霜膏類(lèi)化妝品:稱(chēng)取0.2 g試樣于50mL離心管,混勻。加入3 mL飽和氯化鈉溶液,渦旋混合使樣品分散,加入2mL乙腈,超聲提取5 min,8000 r/min離心5 min,吸取上層清液于另一50 mL離心管中,下層氯化鈉溶液用2mL乙腈重復提取一次,合并二次乙腈提取液,往提取液加入40mL去離子水,混勻,加入亞鐵氰化鉀溶液0.2mL,混勻,加入乙酸鋅溶液0.2mL,混勻,8000r/min離心10min,作為待進(jìn)化液。

    精油類(lèi)樣品:稱(chēng)取0.5g試樣(精確至0.01g)于50 mL離心管,混勻。加入4 mL正己烷,渦旋混合使樣品分散,加入4 mL 50%乙腈水溶液,渦旋提取2 min,8000 r/min離心5min,吸取下層提取液,上層正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液重復上述提取步驟一次,合并二次50%乙腈提取液,往提取液加入36 mL去離子水,混合,加入亞鐵氰化鉀溶液0.1mL,混勻,加入乙酸鋅溶液0.1mL,混勻,8000r/min離心10 min,作為待進(jìn)化液。

    凈化

    將PEP-2固相萃取小柱接上固相萃取裝置,小柱上端緊密連接一個(gè)60 mL裝有篩板的上樣管,小柱預先用5 mL甲醇、10 mL水活化。將上述待凈化液全部上樣,待樣品溶液自然流盡后,再用10 mL 10%乙腈水溶液淋洗小柱,待清洗液自然流盡后,取下上樣管,用吸球吹出小柱中的殘留液。用6mL甲醇洗脫小柱,待甲醇自然流盡后,用吸球吹出小柱中的殘留液,收集洗脫液于40℃氮氣吹干,用1 mL定容液溶解定容,過(guò)0.22 um尼龍濾膜,待測。

    液相色譜條件

    色譜柱:VenusiL ASB C18,3μm,150 ?,2.1*150mm;

    流動(dòng)相:A相:含0.1%甲酸的水溶液;B相:含0.1%甲酸的乙腈溶液;

    梯度洗脫程序見(jiàn)表4;

    柱溫:30℃;

    進(jìn)樣量:10μL。

    表4 流動(dòng)相梯度洗脫條件和流速

    時(shí)間/min

    流速/μL/min

    A/%

    B/%

    0.00

    200

    68

    32

    3.00

    200

    68

    32

    10.00

    200

    25

    75

    15.00

    200

    15

    85

    15.01

    200

    68

    32

    25.00

    200

    68

    32

    質(zhì)譜條件

    離子源:電噴霧離子源;掃描方式:負離子掃描;檢測方式:多反應監測;

    IS:-4500V;

    GS1:55Psi;

    GS2:55Psi;

    TEM:550℃;

    糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物多反應監測的優(yōu)化參數見(jiàn)表5。

    表5 糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物多反應監測的優(yōu)化參數

    藥物名稱(chēng)

    保留時(shí)間/min

    監測離子對

    DP

    EP

    CE

    CXP

    潑尼松龍

    6.22

    405.1/329.1

    -40

    -10

    -20

    -9



    405.1/359.2

    -40

    -10

    -20

    -9

    氫化可的松

    6.35

    407.2/331.1

    -30

    -10

    -22

    -9



    407.2/361.1

    -30

    -10

    -22

    -9

    潑尼松

    6.29

    403.1/326.9

    -50

    -10

    -18

    -9



    403.1/357.2

    -50

    -10

    -18

    -9

    可的松

    6.66

    405.1/329.1

    -40

    -10

    -20

    -9



    405.1/359.2

    -40

    -10

    -20

    -9

    甲基潑尼松龍

    9.02

    419.2/343.0

    -40

    -10

    -22

    -9



    419.2/373.0

    -40

    -10

    -22

    -9

    倍他米松

    9.55

    437.2/361.3

    -60

    -10

    -22

    -1



    437.2/391.1

    -65

    -10

    -22

    -1

    地塞米松

    10.04

    437.2/361.3

    -60

    -10

    -22

    -1



    437.2/391.1

    -65

    -10

    -22

    -1

    曲安奈德

    12.22

    479.1/413.4

    -60

    -10

    -24

    -11



    479.1/337.1

    -40

    -10

    -24

    -11

    氫化可的松醋酸酯

    12.9

    449.2/403.0

    -50

    -10

    -16

    -11



    449.2/373.0

    -50

    -10

    -16

    -11

    潑尼松醋酸酯

    13.42

    447.2/401.1

    -45

    -10

    -18

    -9



    447.2/371.2

    -50

    -10

    -18

    -9

    可的松醋酸酯

    12.30

    445.2/339.1

    -40

    -10

    -16

    -9



    445.2/369.3

    -45

    -10

    -16

    -9

    注:帶"____"的監測離子對為定量離子對。

    結果與討論

    凈化條件的選擇

    目前文獻報道的凈化方法多選用聚合物基質(zhì)的吸附性材料或硅膠基質(zhì)的ODS SPE小柱。本文選用CLeanert PEP-2 SPE小柱,實(shí)驗結果表明其可同時(shí)對11種糖皮質(zhì)激素有很好的吸附。

    考察了不同體積分數0%、5%、10%、20%、30%、40%、50%乙腈的水溶液的洗脫效果,結果表明使用10%乙腈的水溶液,可保證11種糖皮質(zhì)激素不被洗脫下來(lái),所以最終選用10%乙腈的水溶液做淋洗液,并且在上樣之前要用水將乙腈的提取液稀釋。

    液相色譜柱的選擇

    在本文要同時(shí)檢測的11種糖皮質(zhì)激素中,可的松和氫化可的松、倍他米松和地塞米松為同分異構體,在反相液相色譜中比較難分離。通過(guò)比較不同C18的分離效果,最終選用VenusiLASB C18(3μm,150?,2.1 × 150mm)為色譜柱,可保證11種糖皮質(zhì)激素在15min內均達到基線(xiàn)分離。

    線(xiàn)性關(guān)系和檢出限

    將濃度分別為2、5、10、20和50μg/L的混合標準溶液依次進(jìn)樣分析,以峰面積Y對濃度X(μg/L)擬合回歸方程,結果見(jiàn)表6。結果表明,11種糖皮質(zhì)激素分別在2-50μg/L范圍內呈線(xiàn)性,相關(guān)系數r大于0.999,檢出限(S/N=3)為

    表6 11種糖皮質(zhì)激素線(xiàn)性回歸方程和檢出限

    藥物名稱(chēng)

    線(xiàn)性方程

    r

    潑尼松

    Y=16724X-210.43

    0.9991

    潑尼松龍

    Y=23142-11999

    0.9992

    可的松

    Y=16727-9533.1

    0.9998

    氫化可的松

    Y=11244X+692.17

    0.9992

    甲基潑尼松龍

    Y=16312X-15347

    0.9992

    倍他米松

    Y=10695X-6738.1

    0.9994

    地塞米松

    Y=22636-9558

    0.9994

    可的松醋酸酯

    Y=8486.7X+2690.1

    0.9994

    潑尼松醋酸酯

    Y=10652X-7839.4

    0.9997

    氫化可的松醋酸酯

    Y=4372X-2405.8

    0.9995

    曲安奈德

    Y=4062.9X-29840

    0.9992

    準確度和重現性

    以市售玫瑰精油和護手霜為基質(zhì),進(jìn)行添加回收實(shí)驗,進(jìn)行0.1μg/g和0.05μg/g添加濃度的實(shí)驗,11種糖皮質(zhì)激素的回收率均在75%-120%之間,具體實(shí)驗結果請見(jiàn)下列表格:

    表7 玫瑰精油0.1μg/g添加回收實(shí)驗結果

    藥物名稱(chēng)

    平行1

    平行2

    平行3

    平均回收率

    RSD

    潑尼松

    85.19%

    85.65%

    76.98%

    82.61%

    5.90%

    潑尼松龍

    91.68%

    90.70%

    81.07%

    87.82%

    6.68%

    可的松

    93.67%

    92.11%

    82.38%

    89.39%

    6.84%

    氫化可的松

    84.56%

    89.38%

    86.89%

    86.94%

    2.77%

    甲基潑尼松龍

    94.08%

    82.90%

    84.75%

    87.24%

    6.87%

    倍他米松

    89.74%

    90.28%

    80.51%

    86.84%

    6.33%

    地塞米松

    103.10%

    93.90%

    89.10%

    95.37%

    7.46%

    可的松醋酸酯

    87.19%

    87.40%

    92.02%

    88.87%

    3.07%

    潑尼松醋酸酯

    119.07%

    119.86%

    111.63%

    116.85%

    3.89%

    氫化可的松醋酸酯

    91.12%

    91.69%

    87.43%

    90.08%

    2.57%

    曲安奈德

    98.72%

    84.57%

    87.15%

    90.14%

    8.36%

    表8玫瑰精油0.05μg/g添加回收實(shí)驗結果表

    藥物名稱(chēng)

    平行1

    平行2

    平行3

    平均回收率

    RSD

    潑尼松

    78.32%

    75.44%

    86.69%

    80.15%

    7.29%

    潑尼松龍

    85.75%

    85.75%

    86.16%

    85.88%

    0.28%

    可的松

    86.99%

    77.29%

    88.46%

    84.25%

    7.20%

    氫化可的松

    72.36%

    69.15%

    75.04%

    72.18%

    4.08%

    甲基潑尼松龍

    84.80%

    88.74%

    99.95%

    91.16%

    8.62%

    倍他米松

    76.19%

    85.32%

    95.32%

    85.61%

    11.18%

    地塞米松

    80.38%

    79.99%

    90.64%

    83.67%

    7.22%

    醋酸酯可的松

    86.52%

    93.17%

    107.36%

    95.68%

    11.13%

    潑尼松醋酸酯

    119.39%

    107.72%

    111.49%

    112.87%

    5.28%

    氫化可的松醋酸酯

    94.54%

    110.02%

    103.75%

    102.77%

    7.58%

    曲安奈德

    94.10%

    73.98%

    90.74%

    86.27%

    12.49%







    9護手霜0.1μg/g添加回收實(shí)驗結果

    實(shí)驗結論

    使用CLeanertTM PEP-2、VenusiLTM ASB C18建立了一種化妝品中11種糖皮質(zhì)激素同時(shí)檢測的分析方法,實(shí)驗結果表明本方法快速、準確,可用于化妝品中糖皮質(zhì)激素的檢測。

    參考文獻

    【1】鄭星泉,周淑玉,周世偉?;瘖y品衛生檢驗手冊。北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2003.294

    【2】化妝品衛生規范。2007.34

    【3】左志輝,周建玉,左文堅。藥物分析雜志。2004,24(4):420

    【4】張林,孫子林。中國藥物與臨床。2006,6(1):76

    附圖

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